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產品名稱:Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA Purge)
中文名稱:一體式第一鏈cDNA合成超級預混液(去除gDNA)
產品編號與包裝規格:
編號 | 產品名稱 | 規格 | 產品介紹 | 產品價格 |
HKE047-01A | Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (gDNA Purge) | 50次(20μl體系) | 一體式第一鏈cDNA超級預混液(去除gDNA) | 645 |
產品描述:第一鏈cDNA合成預混液是以mRNA或者總RNA為模板,高效 合成第一鏈cDNA。本產品含有反轉錄反應所需的全部試劑 (II Reverse Transcriptase,RNase Inhibitor,Oligo(dT)18,Random N6,dNTPs)。反應時只需要加入RNA模板和水即可,操作簡單,降 低操作過程中的污染。本制品含有去基因組成分gDNA Purge,以 RNA為模板進行cDNA第一鏈合成時,可以同步去除基因組DNA污 染,反應結束后,75℃加熱5分鐘,就可以失活反轉錄酶,RNA酶 抑制劑。合成的第一鏈cDNA能直接用于PCR 或熒光定量PCR的模 板,第二鏈cDNA的合成或線性RNA擴增,也可用于需要用帶有 放射性或非放射性核苷酸標記第一鏈cDNA的實驗。
產品特點:
本制品采用耐高溫逆轉錄酶,大幅提高熱穩定性和 cDNA 合 成效率;
本制品中添加的II Reverse Transcriptase 無 RNase H 活性,可 避免第一鏈 cDNA 合成過程中,RNA/DNA 雜交模板鏈中 RNA 降解,保證 cDNA 合成的質量;
本制品中 Random N6 和 Oligo(dT)18 引物比例經過優化,可均 勻合成樣品中的 cDNA;
本制品中含有去基因組成分,反轉錄時可同步去除基因組 DNA 污染。
保存溫度:-20℃。
產品包裝:
注意事項:
1)用DEPC 處理實驗用到的所有實驗器材,或者 購買已經證明無核酸酶的實驗用具,實驗過程戴 手套并經常更換手套,避免 RNA 酶的污染。
2)確保所用試劑中無 RNA 酶污染。
3) 試劑盒要嚴格密封保存。在反轉錄過程中,所 有管子要確保扣嚴。
4) 純化過的RNA 必須保證不含有鹽,金屬離子, 乙醇和本酚,以上成分會干擾第一鏈 cDNA 的合 成反應。可采用乙醇沉淀RNA 的方法去除掉痕量 污染物。
5) 為保證反轉錄反應的有效進行,需使用高質量 的RNA 模板。
6) 實驗結果顯示,最快逆轉錄速度可達2kb/min, 需要提高反轉錄效率或模板含量較低時可以適當 延長反轉錄時間。
操作方法與常用PCR 循環:
注意:當 RNA 濃度較高或目標基因屬高拷貝基因時,可將去基因組 和逆轉錄合為一步操作,更省時省力。所有組分加到一起,50℃孵 育15-30min,最后75℃孵育5min 終止反應即可。
客戶應用實例與本試劑盒在 37℃條件下保存的穩定性驗證: